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技術文章
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2023-23
CHO細胞外泌體的分離和表征CHO細胞是一種廣泛用于生物制藥蛋白質生產的宿主。CHO細胞中分離外泌體主要采用聚合物的沉淀(PBP)技術從分批培養中分離和富集細胞外泌體囊泡。分離后的外泌體可以通過多種方法來檢測和表征分離的囊泡，這些分析包括動態光散射(DLS)和Zeta電位測量、電子顯微鏡(EM)和外泌體標記物分析、RNA和脂質分析等。一、細胞培養1.培養基與細胞細胞可使用CHO系中的CHO-S細胞。培養基使用CD-CHO培養基（ThermoFisher）。在培養基中添加8mM...
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如何選擇移液槍移液吸頭如何選擇實驗室移液吸頭?任何移液器，其性能和精確度都會因使用質量不佳或不合適的吸頭而受到嚴重影響。移液器和移液器吸頭作為一個系統，只有互相匹配才能保證準確地轉移和輸送液體。在掌握正確的移液技術后，匹配推薦的吸頭，就能保證移液的精度。一般分為：①袋裝吸頭、②盒裝吸頭、③低吸附吸頭、④濾芯吸頭、⑤自動化吸頭等。透明吸頭VS.有色吸頭當前，市場上吸頭基本上都是用聚丙烯塑料（化學惰性高，使用溫度范圍廣的無色透明塑料）做的。不過，同樣是聚丙烯，品質差別也會很大：高...
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如何選購合適的PCR耗材PCR耗材包括PCR管(EP管）、8連排管、96孔PCR板、深孔板等這些材質一般為聚丙烯PP材質，具有高品質、高純度、高透明的特點，一般都在潔凈空間生產加工。PCR耗材為什么一般都是PP材質的呢，為什么需要環境潔凈？因為PCR/qPCR耗材通常會與試劑或樣品直接接觸，而聚丙烯（PP）材質是生物學惰性材料，表面不易于粘附生物分子，且有著良好的化學耐性，及溫度耐受性（可以121℃高壓滅菌，也可以承受熱循環過程中的溫度變化）。這里強調一下耗材質量（是否干凈）...
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實時定量PCR技術中常見問題匯總實時定量PCR技術（real-timePCR）也叫qPCR（QuantitavePCR），是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程，最后通過特定數學原理對未知模板進行定量分析的方法。它是一項臨床上非常成熟的技術，目前在分子生物學領域，qPCR核酸定量的主要方法。目前仍在全球肆虐的病毒鑒定的“金標準”——核酸檢測就是通過qPCR原理進行的。那么拿到一個樣本，需要經過以下多項操作流程才能定量檢測到它的核酸含量。其中...
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使用生物反應器研究乳腺癌亞型細胞外囊泡產生技術使用傳統體外方法生產的EV的深入表征和驗證由于需要大面積的細胞單層和大量的培養基，培養可能具有挑戰性。該實驗方法使用貼壁細胞生物反應器系統以節省空間、資源和時間的方式同時培養多種不同亞型的乳腺癌細胞系，從而能夠持續生產大量用于下游實驗的EV。一、生物反應器接種、適應和維護培養基A：含有10%胎牛血清（FBS，Merck）和1%青霉素/鏈霉素（PS，Gibco）的DMEM（Gibco）。培養基B：AdvancedDMEM/F-12(...
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