細(xì)胞支原體污染的原因

對(duì)于生物實(shí)驗(yàn)器材細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)說(shuō)，如何預(yù)防細(xì)胞的支原體污染是每一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)者的都會(huì)考慮的問(wèn)題，據(jù)統(tǒng)計(jì)，在細(xì)胞污染原因分析中有超過(guò) 60% 的細(xì)胞培養(yǎng)物污染都是由支原體所引起的。那么細(xì)胞支原體污染的原因有哪些呢？

細(xì)胞支原體污染的原因主要包括：
1. 不良操作：如操作者未穿實(shí)驗(yàn)服、未戴口罩、未熏蒸操作臺(tái)等，容易引起污染。
 支原體一般通過(guò)難以追蹤的各種來(lái)源進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)物。其中包括實(shí)驗(yàn)室人員、血清、細(xì)胞培養(yǎng)基、水浴鍋、振蕩培養(yǎng)箱、生物反應(yīng)器、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等。人為污染是上述污染源中最大的污染源。污染物可以通過(guò)臟衣服、實(shí)驗(yàn)室服裝、人在層流氣流附近的講話、人的頭皮、打噴嚏、咳嗽等傳播。此外，無(wú)論細(xì)胞培養(yǎng)物在哪里，人員不斷流入都會(huì)增加污染的風(fēng)險(xiǎn)。
2. 設(shè)備污染：如使用不潔凈的實(shí)驗(yàn)工具，容易引起污染。
支原體可以通過(guò)交叉污染和不良的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)從這些來(lái)源傳播。這些措施包括對(duì)多個(gè)細(xì)胞系重復(fù)使用移液器，而不是使用一次性移液器或重復(fù)使用手套。
3. 實(shí)驗(yàn)環(huán)境污染：如使用不潔凈的實(shí)驗(yàn)室，容易引起污染。
在層流氣流中工作時(shí)（說(shuō)話或移液時(shí)）產(chǎn)生的氣溶膠也是造成污染的主要原因之一。如果細(xì)胞系長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中，產(chǎn)生的這些氣溶膠將在傳代過(guò)程中進(jìn)入培養(yǎng)基或從空氣中進(jìn)入。氣溶膠是肉眼看不見的，因此在導(dǎo)致污染之前無(wú)法檢測(cè)到。

4. 細(xì)胞容易污染：如不潔凈的培養(yǎng)基、不潔凈的細(xì)胞源、生物實(shí)驗(yàn)器材等，容易引起污染。
   培養(yǎng)基和血清也是細(xì)胞支原體污染的主要來(lái)源，培養(yǎng)基主要有液體培養(yǎng)基和粉末培養(yǎng)基兩種。受技術(shù)條件影響，一般支原體也會(huì)通過(guò)粉末培養(yǎng)基進(jìn)行傳播。支原體的直徑一般在0.1微米左右，而我們平時(shí)使用的除菌過(guò)濾一般孔徑為0.22微米，這種孔徑的過(guò)濾器只能起到過(guò)濾細(xì)菌的作用，多數(shù)支原體是不能過(guò)濾被過(guò)濾的。此外，組織培養(yǎng)基多數(shù)都含有指示劑，這些指示劑會(huì)因微生物污染導(dǎo)致 pH 值降低而變黃。所以通過(guò)觀察培養(yǎng)基顏色的或PH值的變化也可以判斷是否有支原體污染。
     血清也是支原體污染的主要來(lái)源。通過(guò)肉眼觀察，在血清中較難發(fā)現(xiàn)支原體污染。但是對(duì)于科研實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō)，由于細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模較小，一瓶胎牛血清往往可以培養(yǎng)多代細(xì)胞，需要反復(fù)凍融很多次，這樣專業(yè)增加了支原體污染風(fēng)險(xiǎn)。還有，血清一般是在高壓滅菌后才添加到培養(yǎng)基中的，因此無(wú)法保證血清無(wú)污染。
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